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应用案例|链霉亲和素磁珠应用于研究肝X受体在胸腺细胞发育

作者:佚名 来源: 日期:2022-6-23 18:11:26 人气:

  T淋巴细胞,包括CD8+和CD4+ T细胞,是细胞和体液免疫反应的重要介质,在胸腺中按发育阶段产生。肝X受体(Liver X receptor, LXRs)是脂质代谢中的关键因子,在T细胞增殖中发挥重要作用。然而,肝X受体是否在胸腺细胞发育中发挥作用仍不清楚。在本文中,研究者们提出了肝X受体β型通过直接结合到Il7r基因的5′-调控区,促进Il7r基因,进而正调节单阳性淋巴细胞的存活。

  为验证这一猜想,研究者检测了在LXRα缺失,LXRβ缺失和野生型小鼠中初始T细胞的数量和频率。为了避免LXRβ被敲除后胸腺微观改变可能导致的影响,研究者使用 LSK (Lin–Sca-1+c-Kit+)细胞混合物生产了辐照变异的骨髓嵌合体小鼠。其中敲除LXRβ和野生型小鼠的数量比为1:1。为了制作骨髓嵌合体,共2000个无LXRβ 的 LSK(Lin–Sca-1+c-Kit+)细胞分别用含有LXRβ、IL-7Rα、Bcl2或空编码序列的逆病毒转染到致命性辐射受体小鼠中,12周重组之后进行分析。

  其中,Lin-细胞的富集是通过磁珠分选的方法。纹身的忌讳和讲究通过链霉亲和素和生物素的相互作用,将生物素化的Lin+标记物固定在BeaverBeadsStrepavidin链霉亲和素磁珠上,利用磁珠去除Lin+细胞。

  研究结果显示,缺失了LXRβ的胸腺细胞分布明显减少了。这种减少包括CD4单阳性和TCRβ+CD8单阳性。同时,双阴性,未成熟单阳性和双阳性胸腺细胞数与野生型小鼠的比没有明显变化。另外,缺失了LXRβ的鼠源CD4+ 和CD8+ T脾细胞数量也有非常明显的下降。这些数据显示肝X受体β型对单阳性胸腺细胞的存活起重要作用。

  

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